PCR實驗室的防污染方法

2021-02-22 09:08:58

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按照實(shi)驗室的安全(quan)工作制度或(huo)安全(quan)標準操作程(cheng)序，所(suo)有(you)操作符合《實(shi)驗室生物(wu)安全(quan)通用要求》（GB19489-2008）。

1、嚴格執行各(ge)區功能劃分：

試(shi)劑儲存(cun)和準(zhun)備區：貯存(cun)試(shi)劑的制備、試(shi)劑的分裝和擴增反(fan)應混合液(ye)的準(zhun)備，以及離心管、吸(xi)頭等消耗品的貯存(cun)和準(zhun)備。

標(biao)本制備區(qu)：核(he)酸（RNA、DNA）提取(qu)、貯(zhu)存及其加入至擴增反應管。對于涉及臨床樣本的操(cao)作，應符合生物安全二級實驗室防(fang)護設備、個人防(fang)護和(he)操(cao)作規范的要(yao)求(qiu)。

擴增區(qu)：cDNA合成、DNA擴增及(ji)檢測。

擴(kuo)增產物(wu)分析區：擴(kuo)增片段的進一(yi)步分析測定，如雜交、酶切電(dian)泳、變性(xing)高效液(ye)相(xiang)分析、測序等。

試劑準備(bei)區、樣本(ben)制備(bei)區和擴增區內(nei)的實驗(yan)用品，包(bao)括移(yi)液器等器具應專用，空氣(qi)、物品流(liu)向依(yi)次為：試劑準備(bei)區、樣本(ben)制備(bei)區、擴增區、產物分析區，不可逆行。

2、清(qing)潔的(de)實驗用品：

實驗室(shi)自配(pei)試(shi)劑（去離子(zi)水(shui)、緩(huan)沖液等）和所有使用(yong)器具在使用(yong)之(zhi)前均(jun)應(ying)高(gao)壓滅菌或紫(zi)外殺菌。槍尖(jian)、反(fan)應(ying)管等實驗耗材應(ying)一次性使用(yong)。

3、正確的實驗操作：

實(shi)驗應(ying)在超凈(jing)工作(zuo)臺內進(jin)行，工作(zuo)臺內應(ying)放置(zhi)PCR專用的微(wei)量離心(xin)機(ji)、各量程(cheng)的移液器(qi)和其他物品(pin)。

實(shi)驗(yan)(yan)的過程中選擇合適(shi)尺寸的手套并能及(ji)時更換，在(zai)進(jin)出不(bu)同實(shi)驗(yan)(yan)區(qu)(qu)域或進(jin)行模板操作后都(dou)應更換實(shi)驗(yan)(yan)服、口罩、帽子及(ji)手套，以避免不(bu)同實(shi)驗(yan)(yan)區(qu)(qu)交叉污染。

PCR實驗室的防污染方法

裝有(you)PCR試(shi)劑(ji)的反應管在(zai)打(da)開(kai)之前(qian)應先(xian)瞬時離(li)心(xin)，將管壁及管蓋上(shang)的液體離(li)至(zhi)管底，降低污染手套或加(jia)樣(yang)器(qi)的風險；謹慎(shen)開(kai)啟反應管，防止管內液體濺出或形成氣溶膠導致污染。

吸(xi)(xi)加試(shi)劑和模(mo)板的操作應(ying)嚴格按照規范要(yao)求進行，遵守“慢吸(xi)(xi)快打”原則(ze)，盡量(liang)一次性(xing)完成，忌(ji)多次抽吸(xi)(xi)，以避免氣溶膠產生的交叉污染。

PCR試劑建議小(xiao)量(liang)(liang)分裝，以(yi)減(jian)少反(fan)復凍融(rong)、重(zhong)復取樣(yang)次數；多樣(yang)本PCR反(fan)應(ying)時，先配制(zhi)反(fan)應(ying)混(hun)合液分裝至(zhi)反(fan)應(ying)管中，然后加入樣(yang)本核酸，請勿同時開蓋，盡量(liang)(liang)保證(zheng)單人單管，實現完全閉管操作。

實驗試劑(ji)應與樣品(pin)和PCR產物分開保存，不應放(fang)于同處。

PCR擴增(zeng)實驗完(wan)成后及時(shi)將(jiang)反應管取(qu)出，用一(yi)次性手(shou)套將(jiang)產物(wu)反應管包裹丟(diu)棄(qi)，保證管蓋緊閉。

4、規范的實驗設計：

應遵循實驗(yan)室內部質量(liang)控制的相(xiang)關規(gui)定，實驗(yan)中設立陽性(xing)(xing)對(dui)(dui)照(zhao)(zhao)、陰性(xing)(xing)對(dui)(dui)照(zhao)(zhao)和空白對(dui)(dui)照(zhao)(zhao)，全(quan)程質控實驗(yan)過(guo)程，驗(yan)證PCR反應的可(ke)靠性(xing)(xing)，并協助判斷擴增系統(tong)的可(ke)信性(xing)(xing)。